곽진언 자랑 다운로드

검토자가 제안했듯이, 우리는 서양 블롯 이미지를 개선된 품질로 대체한 후 내인성 pNDEL1 신호의 증분을 정량화했습니다(이전 그림 1G, 이제 그림 1F로 이동). 내인성 pNDEL1 신호를 항체 중혈의 강한 신호와 명확하게 구별하는 것이 기술적으로 까다로웠기 때문에, 우리는 변성IgG에 최소한의 결합VeriBlot 이차 항체 (Abcam)를 활용했으며, 우리는 우리의 pNDEL1 블롯 품질을 크게 향상시킬 수 있었습니다. 실제로, 우리는 키나아제 과발현에 응하여 내인성 NDEL1 S336/S332 인산화의 상당한 증분을 검출할 수 있었습니다. 1) 저자는 NDEL1 프로모터가 매우 약하다는 것을 인정했습니다. 이 경우, 전기천공에 의해 전달되는 발현 수준을 정당화하는 정보가 없었기 때문에 UBC 프로모터조차도 사용하는 것에 관한 것이다. 더욱이, 신경 형태에 대한 NDEL1/pNDEL1 기능의 손실의 효과는 E15에서 의 전광을 녹다운하여 평가되었지만, 효과 녹다운 또는 교체가 어떻게 작용했는지, 또는 영향을 받는 세포 유형(즉, NPC, 신경교 전구 등)이 어떻게 작용했는지는 분명하지 않다. 인간 NDEL1, 인간 TRIOBP(이소폼 1, hTARA) 및 마우스 Triobp(이소폼 1, mTARA)에 대한 모든 컨스트럭트는 pFLAG-CMV2(시그마-알드리히), pEGFP-C3(클론테크, 마운틴 뷰, CA, 미국) 및 pcDNA3.1/myc-His(Invitrogen)로 복제하여 제조하였다. 인간 DYRK2(hDYRK2) 및 인간 GSK3B(hGSK3β)에 대한 컨스트럭트를 pEGFP-C3 및 pFLAG-CMV2로 복제하였다. Nde1 마우스에 대한 컨스트럭트Nde1(NCBI 뉴클레오티드 ID: NM_023317.2)을 pCIG2-mRFP 벡터로 복제하여 제조하였다. 모든 shRNA 구문은 앞에서 설명한 바와 같이 ntCAAGAGA와 결합된 코어 서열의 19-21 nt를 pLentiLox3.7 벡터로 복제하여 설계하였다(Brummelkamp et al., 2002; 홍 외, 2016).

인간 NDEL1 및 마우스 및 래트 Ndel1모두에 책임이 있는 NDEL1 shRNA의 코어 서열은, hTARA shRNA는 각각 앞서 설명한 바와 같이 GCAGGTCTCAGTTAGA A 및 GCTGAGATTCAATCTCAA(Hong et al., 2016; 응우옌 외, 2004). 제어 스크램블 shRNA의 핵심 서열은 CTACCGTGtGTATTG이었다. 자궁 내 전기천공화에 대한 모든 컨스트럭트는 pCIG2-mRFP, pCIG2-EGFP, 및 pUBC 벡터로 복제하였다.